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汪丛敏 杜润青 李 力 李英惠 张金库
[ 摘要 ] 目的 ：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在卵巢癌中的表达及其与细胞凋亡的关系。 方法 ：分别采用免疫组织化学SP法和TUNEL检测VEGF在45例卵巢癌中的表达及细胞凋亡情况。 结果 ：45例卵巢癌中VEGF阳性表达率为86.7%（39/45）。卵巢癌组织中60%（27/45）细胞凋亡为阳性，40%（18/45）细胞凋亡为阴性。卵巢癌凋亡阴性组中VEGF强阳性表达率88.9%（16/18）高于凋亡阳性组40.7%（11/27）（ P =0.039）。 结论 ： VEGF抑制 肿瘤 细胞凋亡，促进 肿瘤 生长、局部侵袭及远处转移。 保定市第一中心医院妇产科汪丛敏
关键词 ： 卵巢 肿瘤 血管内皮生长因子 细胞凋亡
Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in epithelial ovarian carcinoma and its relationship with the apoptosis
WANG Congmin Du RunQing LI li LI Yinghui Zhang Jinku.
(The Department of Obstetrics and Gynecology, The First Central Hospital of Hebei Baoding,Baodingshi, Hebei 071000, China).
Abstract: Objective To determine the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) in ovarian cancer and its relationship with the apoptosis. Methods The expression of VEGF was evaluated by SP immunohistochemical method ,the apoptosis was detected by TUNEL in 45 cases with epithelial ovarian cancer. Results Positive immunostaining for VEGF was 86.7%(39/45).The negative apoptosis group of ovarian cancer has higher VEGF expression than positive group( P =0.039). Conclution There is a close relationship between VEGF expression and tumor progression in epithelial ovarian patients. The growth, local invasion and metastasis of tumor can be promoted by the VEGF, while the apoptosis is inhibited
Key words: Ovarian carcinomas; Vascular endothelial growth factor; Apoptosis
血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是一种强烈的内皮细胞有丝分裂原和血管生长因子 [1] 。细胞增殖和凋亡的不平衡的病理状态与 肿瘤 的发生、发展密切相关。本研究检测卵巢癌组织中VEGF的表达及其与卵巢癌细胞凋亡的关系，并对其意义进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 临床资料 45例卵巢癌标本取自本院1994~2001年手术切除后存档蜡块，其 中浆 液性囊腺癌27例，黏液性囊腺癌3例，子宫内膜样腺癌15例。年龄35 ~70岁，中位年龄51岁。按照1986年FIGO分期，Ⅰ~Ⅱ期14例，Ⅲ~Ⅳ期31例。选择同期11例因 子宫肌瘤 切除的正常卵巢组织作对照，年龄46 ~51岁，中位年龄50岁，两组具有可比性。
1.2 方法 采用免疫组织化学SP法检测VEGF的表达。VEGF的多克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司（抗体效价为1:100）。细胞凋亡检测采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP断端标记技术（terminal deoxynudeotide transferase mediated nick end labeling, TUNEL）,试剂合购自北京中山生物技术有限公司。石蜡块标本连续切片，厚度为4微米， 肿瘤 组织切片进行微波抗原修复。严格按试剂盒说明进行试验。PBS代替一抗作阴性对照。
作者单位：071000 河北保定 保定市第一中心医院妇产科（汪丛敏、杜润青、李力、李英惠），病理科（张金库）
通讯作者：汪丛敏.E-mail:wcm6705@126.com
1.3 结果判定
1.3.1 SP法 VEGF染色定位于 肿瘤 细胞胞质内和（或）细胞膜被染成棕黄色（见图1）。参照刘薇等 [2] 报道方法，随机选择5个高倍视野（ × 400）计数 肿瘤 细胞总数和阳性细胞个数，得出阳性细胞百分率，并依阳性率分为：背景清晰无着色为-，阳性细胞数<10%为+，阳性细胞数10%~70%为++，阳性细胞数>70%为+++。本研究中-，为阴性；+，为弱阳性；++及+++为强阳性。
1.3.2 TUNEL:凋亡细胞的核呈淡紫色，细胞核形态呈碎片状，不规则，大小不一，而正常非凋亡细胞和阴性对照则细胞核被苏木精复染呈蓝色，核相对较大，形态大小较为一致。随机选择5个高倍视野（ × 400）计数 肿瘤 细胞凋亡数≥5%为阳性，<5%为阴性 [3] 。
1.4 统计方法 采用SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析。
2 结 果
2.1 VEGF在卵巢癌组织中的表达 86.7%（39/45）的卵巢癌细胞表达VEGF，其中，12.8%（5/39）表达为弱阳性（+），87.2 %（34/39）为强阳性（++~+++）；正常卵巢组织可见弱阳性表达。
Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌组织中VEGF强阳性表达率为35.7%，而Ⅲ~Ⅳ期则为93.5%，两者比较差异显著（ P =0.001）。
2.2 卵巢癌组织中的细胞凋亡情况 45例卵巢癌中60%（27/45）细胞凋亡阳性，40%（18/45）细胞凋亡阴性。凋亡阴性组中VEGF强阳性表达率88.9%（16/18），凋亡阳性组中VEGF强阳性表达率40.7%（11/27），两者比较差异显著（ P =0.039）。
3 讨 论
3.1 肿瘤 的生长和转移是一个复杂的多步骤过程，受诸多因素的影响。其中， 肿瘤 血管生成起重要作用。 肿瘤 细胞通过合成分泌血管生成因子调节 肿瘤 组织的血管生成。VEGF是重要的血管生成因子之一，在 肿瘤 血管生成中起着重要的作用。本研究结果显示，45例卵巢癌标本中39（86.7%）例有不同程度的VEGF蛋白表达，其中强阳性表达34例，主要集中在Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌中，而弱阳性表达仅5例，主要集中在Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌中，而在正常卵巢皮质中未见到VEGF强阳性表达，VEGF水平升高，无瘤生存时间及总的生存时间缩短，这与文献 [4、5] 报道一致。表明VEGF不仅与 肿瘤 恶性表型相关，而且在卵巢癌进展中起关键作用，并且其表达量与预后密切相关，可作为预测卵巢癌预后的一个间接指标。
3.2 卵巢癌中VEGF表达与细胞凋亡
多数学者认为， 肿瘤 的发生、发展不仅是细胞增殖失控的结果，也可能是由于细胞凋亡受阻，即细胞增殖与凋亡的失衡决定了 肿瘤 的生长速率。细胞是增殖还是凋亡受许多因素影响，是一个双向调节过程。实验应用TUNEL法检测发现，卵巢癌组织伴有细胞凋亡，阳性率为60%，提示细胞凋亡与卵巢癌有一定关系。
研究证实，在 肿瘤 发生和发展的早期就有新生血管形成，而 肿瘤 细胞的自发性凋亡受 肿瘤 组织中新生血管化程度的显著影响。有报道 [6] 血管生长因子通过介导血管形成而促进 肿瘤 细胞生长，抑制 肿瘤 细胞凋亡。在本研究中，卵巢癌细胞凋亡阴性组VEGF表达阳性率明显高于卵巢癌细胞凋亡阳性组，从而我们有理由推断，阻断VEGF的血管生成作用可能通过促进 肿瘤 细胞凋亡而达到抑制 肿瘤 生长。
参考文献
1. Brustmann H,Naude S.Vascular endothelial growth factor expression in serous ovarian carcinoma:relationship with high mitotic activity and high FIGO stage.Gynecol Oncol,2002,84:47-52
2. 刘薇，袁建国，李东峰，等。卵巢 肿瘤 组织血管内皮生长因子的表达及意义。山东医药。2002，42（23）：34-35
3. 娄阁，高庆玉，隋百华，等。卵巢癌细胞凋亡及相关基因的检测。中国实用妇科与产科杂志。1999，15（4）：225-226。
4. Garz GG,Giavattni A,Lucarini G,et al. Vascular Endothelial Growth Factor expression as a prognostic index in serous ovarian cystoadenocarcinomas:relationship with Mib1 immunostaining J,Gynecol Oncol,1999,73:396-401
5. 李双弟，万小平，桃兆瑞，等。血管内皮生长因子及受体与上皮卵巢癌发展。 肿瘤 ，2003，23（3）226。
6. Dolo V,D’Asenzo S,Violoni S,et al. Matrix-degrading proteinases are shed in membrane vesicles by ovarian cancer in vivo and in vitro.Clin Exp Metastasis,1999,17:131-140
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