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检查单解读一． 供精（取精子）的最佳时间
国内外文献报道，禁欲时间过长，过短对精液质量都有不同程度的影响，《卫生部人类精子库基本操作和技术规范》要求捐精志愿者禁欲3-7天，而世界卫生组织建议2-7天。
所谓“养兵千日，用在一时”对男性而言 ，虽然不用养“精”千日，但精子生成需要72天左右，成熟需要12天左右，该如何“精”打细算，以达到最佳精子品质，能够毕其功于一役成功受孕。长久以来一直是生殖工作者最关心的问题。而在 人工辅助生殖技术中取到好的精子对于 ART 的成功率很重要。 四川省医学科学院·四川省人民医院男科涂肇中
一. 禁欲时间对人类精液质量的影响
（一） 人工辅助生殖供精者与少，弱，畸形精子患者是否禁欲时间一样？
以色列的不孕症研究团队Levitas做了以下课题
6008例男性9489精液样本，根据WHO的标准及分析方法对样本进行严格的评估，将结果分为两组：一组为正常人，另一组为少精症，又分为轻度（10-19.9x0/ml）,中度（4-10x10、重度1-4x10/ml
结果显示：
正常人禁欲3~7天，活力，形态，数目最佳。
>10天，精子质量大为降低。
而少精子组：禁欲一天后的精液质量最好，
>4天，精液质量明显下降。
作者认为：
1. 少精者睾丸制造精子速度比较慢，及运输到附睾的速度要比正常人慢的多，几乎慢了3-4倍时间，存放到附睾可供使用的精子已经快过保存期，精子的质量下降。
2. 为何少精和禁欲时间延长会导致质量下降？
主要是少精子症血液中氧自由基（ROS）量比正常人高。能破坏含大量不饱和脂肪酸的精子死亡，而死亡的精子又释放出更多ROS的去破坏其他更多的精子，产生这样一个恶性循环，使精子质量每况愈下。
3. 采用较佳的禁欲天数及禁欲时间的长短能否影响成功的机会？
Jurema等人针对接受排卵药诱导排卵与人工受孕治疗的不夫妇，发现禁欲天数越长，怀孕率愈低。
禁欲数 3天 4-10天 >10天
怀孕率 14% 10% 3%
（二）．省计生所张欣宗，姚康寿报告2006~2008年6414例精子质量与禁欲时间的关系。
结果显示：
禁欲3~7天，精子质量，精子密度随禁欲时间的延长而增加，前向运动精子百分率随禁欲时间的延长而下降；禁欲时间对精子形态参数，前向运动精子冷冻复苏率无影响；禁欲3~5天的冷的精液合格率明显高于禁欲6~7天，供精者捐精的最佳禁欲时间为3~5天。
主张：对精液量多，精子密度高而前向运动精子百分率低的供精志愿者，可适当减少禁欲时间，反之增加禁欲时间。
（三）禁欲时间对人类精液质量的影响（Fertili Steril 2004:82:57-65）
前瞻性研究
研究禁欲时间对精液参数及精子DNA碎片的影响。
研究机构：比利时Genk生殖技术研究所、美国Minnesota州生殖医学中心。
人群：同意参与不育调查的16名男性志愿者。
主要观察指标：禁欲1天、3天、5天、8天后精液参数（WHO标准）、精子DNA碎片和染色体质量。
结果：因5名志愿者没有严格遵从禁欲时间要求，16名志愿者中只有11名男性纳入分析。禁欲时间对精液量和精液浓度有显著的负面影响，对精液PH值、精子活率、活动率和a级精子比例、形态学无显著影响。不同禁欲时间精子的DNA碎片无明显变化。染色质未成熟精子的比例在禁欲1天的时间里有明显增加。
这是第一篇关于禁欲时间与精液参数、DNA碎片和染色体质量的关系的研究。精子数量、精液体积随着禁欲时间增加而增加，但禁欲时间并不影响精液PH值、活率、活动率和a级精子比例、正常形态和精子DNA碎片。短期禁欲（24h）精子的染色体质量降低，HDS(高度DNA染色的染色质未成熟精子的比例)百分率显著高于禁欲5天的HDS百分率。
（但样本太少且无男性不育精子的对照报告。）
二．精子质量与精子选择的方法
怎样选择健康正常的精子作 ICSI ?
（一） ICSI 中选择精子的新标准：精子头部的双折射性（ Fertil Steril 2008;90:104-12 ）
意大利Bologna市生殖中心Gianaroli等有一份前瞻性的随机对照研究， ICSI时人类精子头部的双折射性在精子选择中的应用。
人群：实验组－根据精子头部双折射性选择精子行ICSI助孕的夫妻，对照组为常规ICSI助孕的夫妻。
研究方法：分别分析精液处理前后头部双折射性精子的比例和精液样本质量的关系。同时比较实验组和对照组胚胎发育和临床结局的情况。研究样本：实验组112例，对照组119例，实验组利用偏光显微镜选择头部双折射性的精子行ICSI助孕，对照组则行常规ICSI助孕。
主要观察指标：比较两组的受精率、卵裂率、妊娠率、种植率、持续妊娠率，并同时分析精液处理前后头部存在双折射性的精子比例和精液样本质量的关系。
结果：正常精液标本中双折射性精子比例显著高于少弱畸精标本（无向前运动精子）和睾丸精子抽吸精子。尽管实验组和对照组受精率和卵裂率无显著差异，但对于男方因素较严重的病例（无向前运动活力的少弱畸精症和睾丸抽提精子），实验组的临床妊娠率、继续妊娠率和种植率显著高于对照组。
实验组、对照组的实验室结果和临床结局
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| 实验组 | 对照组 | P |
| 周期数 | 112 | 119 |
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| 年龄（均数 标准差） | 34.8 4.4 | 35.2 4.5 |
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| 卵子受精数（％） | 235/317(74) | 248/342(72) |
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| 胚胎数（%） | 204(87) | 210(85) |
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| Day2 1级胚胎数（％） | 178(87) | 177(84) |
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| Day2 4细胞的1级胚胎数（％） | 66(32) | 57(27) |
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| Day3 1级胚胎数（％） | 144/164(88) | 117/135(87) |
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| Day3 8细胞的1级胚胎数（％） | 54(33) | 27(20) | <0.025 |
| 移植周期数 | 101 | 104 |
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| 移植胚胎数（均数 标准差） | 184(1.8 0.7) | 196(1.9 0.7) |
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| 临床妊娠例数（％） | 31(31) | 22(21) |
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| 种植数（％） | 35/184(19.0) | 22/196(11.2) | <0.05 |
| 流产例数（％） | 5(16) | 9(41) | 0.035 |
| 持续妊娠例数（％） | 26/112(23) | 13/119(11) | <0.025 |
结论：精子头部双折射性分析既可作为诊断工具，亦可作为ICSI中选择精子的新方法。
三．曲细精管生殖细胞体外，体内培养及精子生成
（一）大鼠曲细精管生殖细胞体外培养及精子生成
内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室张岩; 罗奋华; 吴应积报告：建立体长期共培养体系和观察方法,为精子发生过程的研究提供细胞模型。采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法,对睾丸精细胞作显微镜观察。睾丸取自8D龄大鼠，取出曲细精管组织剪成2mm大小，转移到培养皿中，在37度，5%co2的恒温细胞培养箱中培养，每隔2-3天换一次培养液。用NIKONTE2000-u显微镜接电脑，用自动拍照软件观察，大约在两周开始观察到组织快附近有支持细胞及生殖细胞开始存在，随着时间延长至3个月，可见生殖细胞爆发现象一阵一阵出现，在整个培养体系达6个月中观察到精母细胞到精子细胞不断产生的过程。
结果：培养的支持细胞和生精细胞在体外存活超过6个月。在培养期间,观查精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞。
结论 在不添加任何细胞因子和生长因子的情况下,大鼠曲细精管生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞。这一结果暗示组织块和共生的支持细胞可为生殖细胞的增生和分化提供必需的细胞因子。该方法为体外研究精子发生过程提供了实验依据。
（二）曲细精管生殖细胞体内培养及精子生成
冷冻保存未成熟睾丸组织移植
北京大学深圳医院中心实验室于洁等报告：冷冻后的睾丸组织恢复生精的可能性帮助癌症病人生殖能力以及濒危物种延续可能性。
将新生1~2d龄大鼠的睾丸组织放入-80℃超低温冰箱冷冻保存两周后将冷冻组织移植到雄性去势免疫缺隙小鼠背部皮下4，5，8周取材，观察曲细精管结构与生精细胞，并与新鲜睾丸组织进行对比冷冻移植后的睾丸组织与新鲜睾丸组织相同，未成熟的生殖细胞可以在受体中继续生长发育。继续将小鼠睾丸组织移植物2周再取出进行再移植，二次移植后第四周移植部位观察到有部分包快成长，镜下观察到有圆形精子细胞甚至长形精子细胞。
结论 ：新生小鼠睾丸组织移植物无论是第一次移植，还是将睾丸移植物移植到另一受体可继续存活并生长发育。不需要特殊设备简便易行，适用范围广泛，适合多种场合中生精细胞的冷冻保存。
四．食物，药品对精子的影响
（一）酒对小鼠生长发育及其睾丸功能的影响
南京农业大学动物研究所张高震等报告：长期饮酒对小鼠的长发育及生殖的毒性作用。
选用24只21d龄断奶未成熟小鼠随机分为3组：啤酒组，白酒组和对照组。啤酒组自由饮用啤酒，白酒组饮用稀释的白酒（5%），对照组饮用自来水。实验5周后对体重，脏器重等指标进行称量，对附睾中精子密度，精子畸形率等进行检测，对睾丸的组织学形态进行观察。
结果 整个实验期啤酒组体重显著增加，脏器重受到不同程度的影响；白酒组的精子密度显著降低，在这同时精子畸形率也明显升高，睾丸形态发生了不同程度的病理变化。啤酒组睾丸间质间隙增宽，间质 细胞增生 ；白酒组睾丸间质间隙进一步增宽，生精小管内生精细胞排列紊乱疏松，生精细胞间出现空隙，有的甚至变性，坏死，脱落，部分生精小管生精细胞全部脱落或退化消失，生精小管管壁萎缩变薄。
结论： 长期饮酒对小鼠的生长发育及睾丸功能具有毒性作用
（二） 吸烟造成精子畸形率增高
英国著名杂志《柳叶刀》介绍吸烟会引起畸形。每天吸烟量越多，则畸形精子发生率越高，吸烟史越长，畸形精子也越多，同时出现少，弱精子症，每日吸烟21-30支，精子畸形率显出增高。吸烟造成精子损伤的机理可有：香烟中尼古丁使精子染色体发生突变；燃烟的烟雾可抑制精子的动力酶系统，使精子活力下降；血浆内睾丸酮浓度，形成睾酮结合量下降，精子生成减少
综上所述，人工辅助受精前，应根据患者的具体情况对精子进行预处理：
1．在可能情况下对男性不育患者作3-5次精液检查或对其之前的精液检查做仔细分析，发现其禁欲时间与精液质量间关系，作出取精前禁欲天数的预测。
2．除了把握禁欲时机外，等待人工辅助受精患者应调整日常生活作息，不抽烟，少饮酒，保证睡眠，补充vit E,vit c,锌片,改善精子质量，免得到时入不敷出，：“精精计较”。
3．给患者创造一个安静温馨的取精环境，必要时取精前口服单剂PDE-5抑制剂，给以充分性刺激，得到高质量的精液标本。
4．无精子症患者或及重度少精子患者作睾丸活检时，可考虑做睾丸组织体外培养或多次收集精子冷冻保存，备做人工辅助受精时精子足够。
5．对明显引起精子质量的致病因素如 精索静脉曲张 ，附性腺 感染 等因素先处理后，可使精子质量提高，以增加人工辅助受精的成功率。
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